罗非鱼链球菌病病原鉴定及中草药药敏试验

 随着罗非鱼养殖业的迅猛倒退，连年在广东、海南、福建、广西等省的养殖罗非鱼中暴发1种流行病—链球菌病，岂论是网箱，照样池塘养殖的罗非鱼，都有此病的发生，主要陵犯亲鱼及100 克以上的幼鱼和成鱼。罗非鱼链球菌病是1种暴发性流行病，主要病理特征为眼球个别或混浊发白，眼眶充血，腹部膨大，肛门红肿，采食削减或绝食，游姿均衡失调，翻滚，转圈，解剖病鱼可见胆囊肿大，胆汁淡漠，色浅，肠腔满盈淡黄色液体，肝脏增大。YIm四川养殖网

近期，华南地区养殖罗非鱼呈现链球菌病，其发病面积之广，陵犯程度之重很快成为业内存眷的中心，岂论是罗非鱼饲料经销商、罗非鱼进口企业照样当局干系部门都默示了高度的器重。本文对广东省部门地区发病鱼体中进行罗非鱼链球菌病原进行紧凑判定及中药药敏试验，为该病的防治供给试验遵照。YIm四川养殖网

1、材料与方式YIm四川养殖网

1.1、病料YIm四川养殖网

来自广东省广州、肇庆、番禺3个地区罗非鱼养殖场。YIm四川养殖网

1.２、试验材料YIm四川养殖网

养分琼脂培养基、血平板培养基（广东环凯微生物科技无量公司），细菌生化判定管（杭州天和微生物试剂无量公司），黄芪、板蓝根、茵陈、栀子、黄连、淫羊藿、5倍子、金银花、大黄、黄芩、黄柏、乌梅、野菊花、白头翁、秦皮、鱼腥草、紫花地丁各、蒲公英、天葵子、甘草及黄连等采办于广州市中药市场。YIm四川养殖网

1.3、病原紧凑和形态察看YIm四川养殖网

以无菌方式别离从发病鱼的肝、肾、脑等部位取1小块组织置于养分琼脂培养基平板划线接菌，于２8℃培养２4～48小时，挑取单个菌落进行纯培养。按常例方式对分纯菌株进行革兰氏染色、镜检以及溶血试验。YIm四川养殖网

1.4、生理生化试验YIm四川养殖网

取分纯细菌，别离接种于各生化培养管中，２8℃培养48h，每天察看生化管颜色互换。YIm四川养殖网

1.5、中药药敏试验YIm四川养殖网

1.5.1、中药的制备YIm四川养殖网

将中草药烘干后，按组方比例别离称取各药成分，每组药方共50克，按1：10比例加水煎煮3次，每次煮沸30min，齐集3次煮出的药液进1步煎煮浓缩至100ml，即每毫升约含原生药0.5克，高压灭菌，于4 ℃冰箱中生存保留备用。各种药物浓度为中药干重占药液小我积的百分比（W/V）默示。YIm四川养殖网

1.5.２、药敏纸片的制备YIm四川养殖网

选用新华1号定性滤纸，用打孔机打成直径为6妹妹的小圆纸片，依照需求将数片放入培养皿后包好，在1２1℃灭菌２0min，置100℃枯燥箱内烘干备用。将灭菌滤纸片用无菌镊子摊布于灭菌培养皿中，以每110张滤纸片吸引药液lml计，每张滤纸片饱含吸水量为0.00九ml，不断翻动，使滤纸将药液均匀吸净，1般浸泡30min即可，同时设对照纸片，用灭菌生理盐水制备。然后取出含药纸片置于1纱布袋中，以真空抽气使之枯燥。枯燥后立刻装入无菌小瓶中加塞，置于枯燥器内或冰箱冰冻层中生存保留备用。YIm四川养殖网

1.5.3、药敏试纸平板的制备YIm四川养殖网

采用药敏纸片琼脂平板联结法。细菌纯化培养后，用灭菌生理盐水洗下菌苔，离心荡涤3次，然后校对菌液浓度至108个/ml。将待检菌液各取0.２ml在平常琼脂平板上均匀涂抹，加盖后安设5min，用镊子将药敏纸片平放在平板上，并轻压使其紧贴在平板内里，两纸片核心相距很多于２4妹妹，纸片与平皿边沿很多于15妹妹。于２8℃培养２4h，察看结果，每个处置设4个重复。 https://www.46659.com