分子生物学检测技术

近年来随着分子生物学技术的普及，应用先进的仪器设备直lHm四川养殖网

接检测病毒核酸成为生产中高度敏感与特异的检测手段。检测病lHm四川养殖网

毒常用的分子生物学检测技术主要包括多聚酶链反应(Polymer—lHm四川养殖网

ase chain reaction，PCR)和核酸探针杂交两种。lHm四川养殖网

1．多聚酶链反应 这是一种体外基因扩增法。先将待检标lHm四川养殖网

本DNA热变性为单股DNA作为模板，加一对人工合成的与模板lHm四川养殖网

DNA两端一段核苷酸序列互补的引物，在耐热DNA多聚酶作用lHm四川养殖网

下，使4种脱氧核苷按模板3端引物向5端延伸DNA链，经28～lHm四川养殖网

30个循环，可使1个拷贝的核酸扩增至106个以上，经琼脂糖电lHm四川养殖网

泳，可见到溴化乙锭染色的核酸条带，扩增片段的大小取决于两引lHm四川养殖网

物的间距。此法较核酸探针杂交敏感、快速，已用于大多数鸡病的lHm四川养殖网

感染诊断，尤其适用于不易分离培养及含量极少的病毒标本，有较lHm四川养殖网

大应用前景。lHm四川养殖网

2．核酸探针杂交核酸探针杂交具有高度敏感性和特异性，lHm四川养殖网

常用于检测样本中的病原。斑点杂交是首先将标本滴加到硝酸纤lHm四川养殖网

维素膜上，病原DNA结合到膜上，在原位进行碱变性处理后，将lHm四川养殖网

膜浸泡于含有标记的已知病原DNA片段作为核酸探针的杂交液lHm四川养殖网

中，两条单股核酸按碱基互补配对原则结合成双股，经放射自显影lHm四川养殖网

或酶促反应显色，阳性结果出现斑点状杂交信号lHm四川养殖网
 lHm四川养殖网